目前制备生姜蛋白酶的方法主要有两种：一种是反胶束萃取法;另一种是以生姜丙酮干粉为原 料的制备方法。两种方法各有特点，现分别介绍如下。
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实例236 反胶束萃取制备生姜蛋白酶 中国乡村网
蔡海燕等开发的反胶束萃取纯化生姜蛋白酶工艺，以阴离子反胶束从粗酶提取液中进行分离纯化生姜蛋白酶，其主要优点是选择性较高，可在室温下进行处理，反胶束经处理后可再次回用。
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( 1 )工艺流程 内容来自http://xcwt.org/
( 2 )主要步骤
① 粉碎、提取 称取Ikg 采摘3 天以内的新鲜生姜块茎，切成约1cm * 1cm 小块，加入4L 温度为4 ℃ 、pH 值为6 .0的0.2mol / L 磷酸缓冲液，置于高速组织匀浆机中粉碎，8 层纱布过滤。收集滤液，滤渣再次用6L 上述缓冲液分两次进行匀浆粉碎处理，同法过滤，弃滤渣，合井滤液。 乡村网
② 盐析 将收集的滤液用离心机以4000r / min 的转速离心10min ，收集上清液，加入饱和硫酸按溶液进行盐析，使上清液中的硫酸钱终饱和度达到60 %时止。
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③ 脱盐 将盐析液用离心机以4 000r / min 转速离心15min , 收集不溶物用少量pH 7 . 50 的柠檬酸缓冲液溶解，在4 ℃ 下对同种缓冲液透析脱盐8h ，获得粗生姜蛋白酶提取液。
④ 萃取除杂 取1L 粗生姜蛋白酶提取液，加入等体积0 . 05 mol / L 的AOT -异辛烷反胶束液，用电动搅拌器以2OOr / min 搅拌萃取5min ，以除去提取液中的部分杂蛋白。4000r / min 离心10min，收集萃余液，再次用等体积0.05mol / L 的AOT-异辛烷反胶束液同法萃取及分离。 http://xcwt.org/
收集荷载有杂蛋白的AOT -异辛烷反胶束，用等体积的0 . lmol / L NaCI 溶液反萃取3 次，除去荷载的杂蛋白后用离心机以4000r / min 转速离心10min ，弃下层水相，上层反胶束可再次用于萃取杂蛋白。
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① 萃取蛋白酶 向除去部分杂蛋白的萃余液中加入等体积的0.lmol / L 的CTAB 庚烷-辛醇反胶束液，用电动搅拌器以2 00r /min 。搅拌萃取15min ，然后用离心机以4000r / min 转速离心10min , 分别收集上层CTAB 庚烷-辛醇反胶束液及下层萃余液。向萃余液中加入等体积的0.1mol / L 的CTAB 庚烷-辛醇反胶束液，用电动搅拌器以200r / min 搅拌再次萃取1 弓m 谊，然后用离心机以400Or / min 转速离心10min ，分别收集上层CTAB 庚烷-辛醇反胶束液及下层萃余液。 乡村网
② 反萃取 合并荷载有生姜蛋白酶的CTAB 庚烷-辛醇反胶束液，用等体积0 . lmol / L NaCI 溶液反萃取3 次，条件同萃取。然后用离心机以4000r / min 转速离心10min ，分别收集上层CTAB 庚烷一辛醇反胶束液及下层反萃取液。
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⑦ 超滤浓缩 将下层反萃取液用截留分子量2XI 的超滤器进行超滤浓缩，浓缩至反萃取液体积的工/5 时装入冻干瓶中，于-60～-50 ℃ 、真空度为2 0～50Pa 条件下干燥24h ，获得生姜蛋白酶冻干粉。 本文来中国乡村网
( 3 )主要指标
白色粉末，生姜蛋白酶总回收率为60 . 25 % ，其比活力为49 . 77U /μg 蛋白质。
