酶是蛋白质,因此可用提取、分离蛋自质的方法进行纯化,获得相应产品。下面介绍几种酶的纯化新方法。
胰脏是动物的主要消化腺,含有多种酶及生物活性物质,例如核糖核酸酶A 、胰蛋白酶、胰凝乳蛋白酶和激肽释放酶等。核糖核酸酶A 分解RNA 的3 ' , 5’-磷酸二酯白酶(包括肪酶)分解蛋白质或肽的肽键。胰蛋白酶专一作用于由碱性氨基酸精氨酸及亮氨酸狡基所组成的肽键,是由胰蛋白酶原在肠激酶或自身催化下转化成的有活性的酶,该酶溶于水,不溶于氯仿、乙醇、乙醚和甘油;在pH < 3 时,钙离子对其有激活作用。糜蛋白酶(EC 3.4.4.5)又称胰凝乳蛋白酶,有多种类型,均由酶原激活产生。a -糜蛋白酶由3 条链组成,其活性中心氨基酸残基为His37 、Asp102 、Ser195 ,优先水解L-Tyr 和L - Phe 的梭基所形成的肽键;该酶PI8 . l- 8 . 6 ,分子量4200 0,最适pH8-9 。弹性蛋白酶( EC 3 . 4 . 4 . 7 )又称胰蛋白酶E ,其活性中心为His45 、Asp93 、Ser88 ; pI 为9 . 5 ,最适pH 7 . 4 - 10 . 3 。激肽释放酶(EC 3 . 4 . 4 . 21 )是内切水解酶,活性中心为丝氨酸和组氨酸,pI 为3 . 9 - 4 , 37 ,最适作用温度为37 ℃ ,pH 值为5 -7 . 8 。
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蛋白质的分子量不同,其体积有明显差异,通过一定孔径的凝胶柱所需的时间不同,因此可用凝胶过滤进行分离;蛋白质表面主要为带电荷和极性不带电荷的氨基酸残基侧链基团组成的亲水区域所占据,这些基团分别与溶液中相反电荷的离子形成双电层或与水分子形成氢键。高浓度中性盐[例如〔 NH ;]。可破坏双电层并降低水分子活度,使蛋白质失去保护,相互聚集析出,因此用中性盐盐析可初步分离蛋白质。不同蛋白质的等电点有差异,其荷电性质及荷电量不同,可用带相反电荷的反胶束在常温下萃取,从而实现部分纯化;荷电的侧链基团可分别与带相反电荷的离子交换树脂形成离子键,因此用离子交换法也可以分离纯化蛋白质;此外,蛋白质表面的疏水区域(或非极性区域)可与疏水性(或非极性)吸附树脂形成吸附,极性区域则与极性吸附树脂形成吸附,因此,吸附法也可以部分纯化蛋白质。 本文来中国乡村网